Resolución (INV) C.2/14. Del 17/2/2014.
B.O.: 25/2/2014. Oficialízase el método de “DETERMINACION DE LA RELACION
ISOTOPICA 180/160 DEL AGUA CONTENIDA EN LOS VINOS” que, junto a su
VALIDACION, obran como ANEXO a la presente resolución.
Mendoza, 17/2/2014
VISTO el Expediente Nº S093:0012042/2013 del Registro del INSTITUTO
NACIONAL DE VITIVINICULTURA, la Ley General de Vinos Nº 14.878, la
Resolución Nº C.24 de fecha 19 de agosto de 2003, y
CONSIDERANDO:
Que por el citado expediente se tramita la oficialización del método y
validación de determinación de relaciones isotópicas del oxígeno en el
agua de los vinos por espectrometría de masas.
Que los resultados del método oficial establecido por la Resolución Nº
C.24 de fecha 19 de agosto de 2003, no presentan diferencias
significativas con el método propuesto, adecuándose a la modernización
instrumental.
Que dicha determinación posibilita el control de la autenticidad de
vinos a través del valor de la relación isotópica de los isótopos
estables del oxígeno 180/160, efectuada sobre el agua del vino, mediante
un equipo Espectrómetro de Masas de Relaciones Isotópicas de Isótopos
Estables (IRMS).
Que el factor responsable de dicha relación es el fraccionamiento
isotópico que se produce en los procesos de asimilación y
evapotranspiración del agua en la planta.
Que desde el año 1996 esta determinación es la base del Método Oficial
de la OFICINA INTERNACIONAL DE LA VIÑA Y EL VINO (OIV) para establecer
el origen del agua en los vinos.
Que la REPUBLICA ARGENTINA es país miembro de la O.I.V., representación
ejercida por el INSTITUTO NACIONAL VITIVINICULTURA (INV), y ha
participado en la aprobación de este método.
Que desde el momento de su aprobación, es un método aplicable en los
estados miembros.
Que este método ha sido validado con la participación de Organismos de
reconocido prestigio internacional.
Que el método, al utilizar el banco de datos de origen indudable de
relaciones isotópicas, permite determinar si un vino ha sido adicionado
de agua exógena y evaluar su grado de adición.
Que esta determinación tiene el respaldo científico suficiente para
adoptarse como norma de control oficial por el INSTITUTO NACIONAL DE
VITIVINICULTURA (INV).
Que Subgerencia de Asuntos Jurídicos de este Instituto ha tomado la
intervención de su competencia.
Por ello, y en uso de las facultades conferidas por la Leyes Nros.
14.878 y 24.566 y el Decreto Nº 1.306/08,
EL PRESIDENTE DEL INSTITUTO NACIONAL DE VITIVINICULTURA
RESUELVE:
1° — Oficialízase el método de “DETERMINACION DE LA RELACION ISOTOPICA
180/160 DEL AGUA CONTENIDA EN LOS VINOS” que, junto a su VALIDACION,
obran como ANEXO a la presente resolución.
2° — La adopción del presente método, entrará en vigencia a partir del
día 5 de marzo de 2014.
3° — Derógase la Resolución Nº C.24 de fecha 19 de agosto de 2003 y toda
otra norma que se oponga a la presente resolución.
4° — Regístrese, comuníquese, publíquese, dése a la Dirección Nacional
del Registro Oficial para su publicación y cumplido, archívese.
ANEXO A LA RESOLUCION Nº C. 2/14.
METODO DE DETERMINACION DE LA RELACION DE
ISOTOPOS 18O/16O DEL AGUA EN VINOS
1. OBJETIVO DEL SISTEMA METODOLOGICO
El presente sistema permite a través del método y del banco de datos de
origen indudable, determinar si un vino ha sido adicionado de agua
exógena, por espectrometría de masas para relaciones de isótopos 18O/16O
(IRMS).
2. PATRONES DE REFERENCIA
V-SMOW: Vienna-Standard Mean Ocean Water (18O/16O = RV-smow = 0,0020052)
GISP: Greenland Ice Sheet Precipitation.
SLAP: Standard Light Antarctic Precipitation.
Patrones de referencia secundarios: obtenidos de laboratorios
acreditados
3. DEFINICIONES
18O/16O Relación de los isótopos 18 y 16 del oxígeno de una muestra
concreta.
El patrón V-SMOW se toma como referencia para la escala relativa.
BCR: Oficina Comunitaria de Referencia
OIEA: Organismo Internacional de la Energía Atómica, con sede en Viena
(Austria)
IMMR: Instituto de Medidas y Materiales de Referencia
IRMS: Espectrometría de masas para relaciones de isótopos (Isotope Ratio
Mass Spectrometry)
m/z: Relación entre masa y carga
NIST: Instituto Estadounidense de Patrones y Tecnología (National
Institute of Standards & Technology)
MR: Material de referencia.
4. FUNDAMENTO
La técnica que se describe a continuación está basada en el equilibrio
isotópico que se establece en el agua presente en muestras de vino
mediante un patrón de CO2, según la siguiente reacción de intercambio
isotópico:
Una vez alcanzado el equilibrio, el dióxido de carbono de la fase
gaseosa se analiza mediante IRMS. La relación isotópica (18O/16O) se
determina a partir del CO2 que resulta de la reacción.
5. REACTIVOS Y MATERIALES
El instrumental y los materiales fungibles dependen del método elegido
(véase el apartado 6). En los métodos usados normalmente se utiliza CO2
para inducir el equilibrio en el agua del vino.
Pueden utilizarse los siguientes materiales de referencia, patrones
internos y materiales fungibles:
5.1 Materiales de referencia
5.1.1 Dióxido de carbono como patrón secundario para la medición (Núm.
CAS 00124-38-9).
5.1.2 Dióxido de carbono para el equilibrado (dependiendo del
instrumento, este gas puede ser el mismo que en 5.1.1 o bien la mezcla
de gases helio-dióxido de carbono, en el caso de los cilindros con
sistema de flujo continuo).
5.1.3 Material de Referencia cuyo valor en escala 18OV-SMOW emitido por
laboratorio acreditado.
5.3 Materiales fungibles
Helio para análisis (Núm. CAS 07440-59-7)
6. INSTRUMENTAL
6.1 Espectrometría de masas para relaciones de isótopos (IRMS)
El espectrómetro de IRMS analiza el contenido de relaciones relativas en
el CO2 con una precisión interna del 0,060/00. Por precisión interna
entendemos la diferencia entre dos medidas de una misma muestra de CO2.
El espectrómetro de masas que se utiliza para determinar las relaciones
isotópicas suele disponer de un detector triple, lo que permite medir
simultáneamente tres corrientes distintas:
- m/z = 44 (12C16O16O)
- m/z = 45 (13C16O16O y 12C17O16O)
- m/z = 46 (12C16O18O, 12C17O17O y 13C17O16O)
Medidas las intensidades, la relación isotópica (18O/16O) se obtiene a
partir de la intensidad de m/z = 46 y m/z = 44. Se realiza una
corrección, pues hay que tener en cuenta la aportación de las especies
moleculares 12C17O17O y 13C17O16O. Dicha aportación se calcula a partir
del valor de la intensidad de m/z = 45 y las cantidades normales de los
isótopos 13C y 17O que se dan en la naturaleza.
El espectrómetro deberá disponer de uno de los dos sistemas siguientes u
otro sistema que asegure la introducción cuantitativa de la muestra:
- sistema de flujo continuo capaz de transferir cuantitativamente en el
espectrómetro no sólo el CO2 de los recipientes que contienen las
muestras en equilibrio, sino también el patrón de CO2.
- sistema de doble entrada para analizar alternativamente la muestra y
un patrón de referencia.
6.2 Instrumental y material auxiliar (a modo de ejemplo)
Las características de todos los instrumentos y los materiales deben
corresponder a las exigencias del método o del equipo utilizado
(especificadas por el fabricante). No obstante, se pueden utilizar otros
instrumentos o materiales que tengan las mismas prestaciones.
6.2.1 Frascos con septo adaptado al sistema empleado.
6.2.2 Pipetas aforadas, automáticas, tips.
6.2.3 Sistema de control de la temperatura para que la reacción de
intercambio isotópico se lleve a cabo a una temperatura constante.
6.2.4 Bomba de vacío (si el sistema lo requiere).
6.2.5 Cambiador de muestras (si el sistema lo requiere).
6.2.6 Jeringuillas para las muestras (si el sistema lo requiere).
6.2.7 Columna de cromatografía de gases para separar el CO2 de gases
elementales (si el sistema lo requiere).
6.2.8 Sistema para extraer el agua (ej. cryo-trap o membranas permeables
selectivas, si el sistema lo requiere).
7. PREPARACION DE LAS MUESTRAS
Las muestras de vinos y los materiales de referencia se utilizan para el
análisis sin tratamiento previo.
A ser posible, los patrones usados para calibrar y para corregir las
desviaciones deberán preferiblemente colocarse al inicio y al fin de
cada serie e intercalarse cada diez muestras.
8. PROCEDIMIENTO
Determinar la relación isotópica 18O/16O induciendo el equilibrio en el
agua con CO2 y posterior análisis mediante IRMS. Los procedimientos
pueden adaptarse en función de los cambios introducidos por los
fabricantes del equipo o del instrumental, ya que existen varios tipos
de sistemas de equilibrado, que implican varias maneras de operar.
Pueden utilizarse dos procedimientos técnicos principales para la
introducción de CO2 en el IRMS, ya sea a través de un sistema de doble
entrada o un sistema de flujo continuo. No es posible realizar la
descripción de todos estos sistemas y de sus correspondientes maneras de
operar, se describen algunos a modo de ejemplo.
______
Nota: los volúmenes, temperaturas, presiones y tiempos se dan a título
indicativo. Los valores adecuados deben buscarse en las especificaciones
facilitadas por el fabricante o determinarse experimentalmente.
8.1 Equilibrio inducido automáticamente y con sistema de flujo continuo.
Con una pipeta, transferir una alícuota de la muestra o del patrón a un
frasco. Disponer los frascos en una bandeja con control de temperatura.
Con una jeringuilla de gases, introducir en los frascos una mezcla de He
y CO2. El CO2 se queda en la parte superior de los frascos.
El equilibrio se alcanza transcurridas, como mínimo, 18 horas,
normalmente a una temperatura constante.
Una vez finalizado el proceso, transferir el CO2 obtenido al
espectrómetro de masas mediante el sistema de flujo continuo. También se
utiliza el flujo continuo para introducir el patrón de CO2. La medida se
efectúa según el manual del equipo.
8.2 Equilibrio inducido manualmente
Con una pipeta, transferir una alícuota de la muestra o del patrón a un
matraz. Ajustar el matraz al extractor.
Enfriar a menos de -80 °C para que se congelen las muestras (los
extractores equipados con tubos de apertura capilar no requieren esta
etapa de congelado). A continuación, se produce el vacío en todo el
sistema.
Una vez alcanzado un vacío estable, dejar que el patrón de CO2 se
distribuya en el interior de los matraces. Para inducir el proceso de
equilibrio se utiliza un baño de agua a 25 °C (± 1 °C) durante 12 horas
(por la noche). Es muy importante que la temperatura del baño de agua se
mantenga constante y homogénea.
Una vez finalizado el proceso de equilibrado, transferir el CO2
resultante de los matraces al fuelle regulador de la muestra del sistema
de doble entrada. Las medidas se llevan a cabo por comparación de las
relaciones isotópicas del CO2 de la muestra y del patrón de CO2 (situado
en el fuelle regulador de patrón). Repetir hasta que se hayan medido
todas las muestras de la serie.
8.3 Equilibrio inducido automáticamente
Con una pipeta, transferir una alícuota de la muestra o del patrón a un
frasco. Los frascos de muestras se ajustan al aparato y se enfrían a
menos de -80 °C para que se congelen las muestras (los sistemas
equipados con tubos de apertura capilar no requieren esta etapa de
congelado). A continuación, producir el vacío en todo el sistema.
Una vez alcanzado un vacío estable, se deja que el patrón de CO2 se
distribuya en los frascos. El equilibrio se alcanza a 22 ± 1 °C
transcurridas 5 horas como mínimo y, a ser posible, con agitación suave.
Dado que la duración del proceso depende de varios parámetros (por
ejemplo, la forma del frasco, la temperatura y la agitación), el tiempo
mínimo requerido ha de determinarse experimentalmente.
Una vez finalizado el proceso, el CO2 resultante se transfiere de los
frascos al fuelle regulador de la muestra del sistema de doble entrada.
Las medidas se llevan a cabo por comparación de las relaciones
isotópicas del CO2 de la muestra y del patrón de CO2 (situado en el
fuelle regulador de patrón). Repetir hasta que se hayan medido todas las
muestras de la serie.
8.4 Preparación manual para equilibrado manual y automático y análisis
con doble entrada IRMS.
Introducir un volumen definido de muestra/estándar (ej. 200 µL) en un
tubo de ensayo con ayuda de una pipeta. Los tubos de ensayo abiertos se
colocan en una cámara cerrada que contiene el CO2 utilizado para el
equilibrado. Después de varias purgas para eliminar todo resto de aire,
los tubos se cierran y se colocan en la bandeja con termostato del
intercambiador de muestras. El equilibrado se alcanza después de al
menos 8 horas a 40 °C. Una vez que se ha terminado el procedimiento de
equilibrado, secar el CO2 obtenido y transferir al lugar de la muestra
del sistema de inducción con doble entrada. Las mediciones se realizan
comparando varias veces las relaciones del CO2 contenido en el lado de
la muestra y en el lado estándar (CO2 gas estándar de referencia) de la
doble entrada. Este procedimiento se repite hasta que se haya medido la
última muestra de la secuencia.
9. CALCULOS
10. RESULTADOS ESTADISTICOS
Valores (intensidad), sin ajuste con el MR
La repetibilidad (r) del método es del 0,40/00
La reproducibilidad (R) del método es del 0,60/00
11. ASPECTOS METODOLOGICOS
El sistema metodológico aplicado comprende la técnica analítica y el
análisis de los datos arrojados por el instrumental correspondiente y
resulta de estudios comparativos con la base de datos de referencia, que
cubre todas las regiones del país, con un número de datos
estadísticamente representativos y cualitativamente consistentes. Esta
aplicación requiere considerar y ponderar la variabilidad entre los
diferentes puntos estudiados por regiones en todo el territorio
productivo nacional.
BIBLIOGRAFIA
